Главная » 2013 » Ноябрь » 1 » Скачать Получение препарата грибной -галактозидазы для коррекции лактазной недостаточности. Сухих, Ольга Анатольевна бесплатно
12:27
Скачать Получение препарата грибной -галактозидазы для коррекции лактазной недостаточности. Сухих, Ольга Анатольевна бесплатно
Получение препарата грибной -галактозидазы для коррекции лактазной недостаточности
Диссертация
Автор: Сухих, Ольга Анатольевна
Название: Получение препарата грибной -галактозидазы для коррекции лактазной недостаточности
Справка: Сухих, Ольга Анатольевна. Получение препарата грибной -галактозидазы для коррекции лактазной недостаточности : диссертация кандидата биологических наук : 03.00.23 / Сухих Ольга Анатольевна; [Место защиты: Рос. хим.-технол. ун-т им. Д.И. Менделеева] Москва, 2007 177 c. : 61 07-3/1237
Объем: 177 стр.
Информация: Москва, 2007
Содержание:
ВВЕДЕНИЕ
Глава I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
11 р-галаетозидаза и источники ее получения
12 Механизм действия р-галактозидазы
13 Свойства Р-галактозидаз из различных источников
14 Выделение и очистка Р-галактозидаз
15 Применение препаратов Р-галактозидазы
16 Анализ обзора литератры и задачи исследований ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Глава II МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
21 Методы выделения и очистки фермента
22 Методы определения ферментативной активности
23 Методы химических анализов
24 Методы определения степени чистоты препарата
25 Определение молекулярной массы
26 Определение изоэлектрической точки
27 Определение оптимальньк условий действия и стабильности фер- мента
28 Определение влияния различных реагентов на активность Р-галак- тозидазы
29 Определение кинетических констант гидролиза субстратов
210 Определение специфической активности р-галактозидазы
211 Определение микробиологической чистоты препарата
Глава III РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
31 Исследование ферментативного комплекса исходного препарата Лактоканесцин
32 Выделение и очистка Р-галактозидазы из исходного комплексного препарата
321 Изучение стабильности р-галактозидазы в водном растворе
322 Разработка способа очистки Р-галактозидазы методом ультрафильтрации
323 Очистка концентрата от микрофлоры методом микрофильтрации
324 Разработка способа очистки Р-галактоидазы от протеиназы
33 Технологическая схема получения лекарственной субстанции (препарата Галактозим) и ее апробация
34 Разработка способа получения высокоочищенной Р-галактозидазы (фермент-стандарта)
341 Выбор условий предварительной очистки фермента
342 Выбор оптимальных условий хроматографического процесса
343 Обессоливание и концентрирование элюата
344 Исследование способов
Глава а- и Р-галактозидаз
35 Определение степени чистоты препаратов Р-галактозидазы
36 Изучение физико-химических и каталитических свойств Р-галактозидазы
361 Влияние рН среды на активность фермента
362 Влияние температуры на активность р-галактозидазы
363 Влияние ионов металлов и специфичесих реагентов на активность Р-галактозидазы
364 Оределение молекулярной массы
365 Определение изоэлектрической точки
366 Определение кинетических характеристик Р-галактозидазы
661 Определение константы Михаэлиса
3662 Определение характера ингибирования и константы ингибирования Р-галактозидазы продуктами гидролиза
37 Изучение специфического действия Р-галактозидазы
371 Изучение динамики гидролиза лактозы в молочных продуктах препаратом Галактозим
372 Разработка готовой лекарственной формы препарата Галактозим и изучение его эффективности в условиях, имитирующих среду организма
3721 Изучение некоторых фармакологических свойств готовой лекарственной формы препарата Галактозим
3722 Сравнение эффективности действия препаратов Галактозим и Лактраза на лактозу молочных продуктов
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
Введение:
Актуальность темы. Согласно статистическим данным в последние годы в мире значительно сократились темпы роста производства ферментных препаратов для традиционньк отраслей применения (пищевая промышленность, быговая химия, переработка отходов, сельское хозяйство и пр.) ввиду насыщения рынка, в то время как объем производства ферментов для медицинских целей непрерывно растет. По оценкам американской консалтинговой фирмы «Business Communications», среднегодовой прирост объема продаж ферментов медицинского назначения составляет 25,4%. На сегодняшний день в мировой практике до 50% ферментов, используемых в медицине, получают из микробного сырья. Препараты на основе ферментов используются для профилактики и лечения нарушений пищеварительных процессов, заболеваний сердечно-сосудистой системы, при системной терапии воспалительных процессов, для лечения онкологических заболеваний, ожоговых ран, заболеваний полости рта и др. Наиболее емким является рьшок пищеварительных ферментов. Это связано с тем, что с ухудшением экологической обстановки и повышением психоэмоциональных нагрузок число людей, страдающих нарушениями пищеварения, связанными с недостаточным образованием ферментов, растет из года в год. Одной из серьезных ферментных патологий является дефицит в организме человека лактазы (гиполактазия). Лактаза (Р-галактозидаза) фермент, вырабатываемый в верхнем отделе тонкого кишечника и катализирющий расщепление лактозы (молочного сахара) на глюкозу и галактозу, которые затем легко всасываются в кровь. Отсутствие или недостаток лактазы приводят к тому, что больные не могут использовать в своем рационе молоко и молочные продукты [Валенкевич, 1989; Turck, 2004]. Это заболевание особенно опасно для детей грудничкового возраста, т. к. молоко является для них основным продуктом питания, и найти молоку полноценную замену для грудных детей чрезвычайно сложно [Корниенко и др., 2006]. По данным ряда авторов, из-за отсутствия или недостатка в слизистой оболочке тонкой кишки лактазы непереносимость молока встречается у 15-30% и более населения нашей страны [Валенкевич, Яхонтова; 1991, Жвавый и др., 1991; Козлов, 1992]. Лицам, страдающим гиполактазией, ранее рекомендовалось исключать из пип1,и молоко и молочные продукты. Однако необходимо помнить, что молоко занимает особое место среди продуктов питания человека, являясь источником белка, кальция, рибофлавина [Лоранская и др., 1997]. Исключение из рациона молока и молочных продуктов при гиполактазии, особенно у детей, приводит к неоптимальности регулирующих систем организма [Котлукова, 1994]. Лактозная непереносимость может быть преодолена двумя путями: использованием молочных продуктов с частично гидролизованной лактозой, либо приемом биологически активных добавок или лекарственных препаратов, содержащих лактазу. В настоящее время за рубежом рядом фирм внедрена в производство технология получения низколактозного молока путем предварительного расщепления в нем лактозы с помощью ферментных препаратов микробного происхождения. Низколактозные продукты выпускаются в большинстве стран Западной Европы, Аргентине, Канаде, Японии, Новой Зеландии, США и др. Новым шагом в лечении гиполактазии стало появление лекарственных препаратов на основе р-галактозидаз микробного происхождения. Первый из подобных ферментных препаратов в таблетированной и жидкой формах был получен фирмой «Sugar Lo Со» (США) из дрожжей Kluyveromyces lactis («LactAid») и применялся для обработки молока перед употреблением в домашних условиях. Затем фирма «Fermentation Industries Kingstree» (США) выпустила в продажу порошок для приема внутрь («Lactrase-N»), содержащий лактазу из микроскопического гриба Aspergillus niger. Известен японский препарат «Галантаза» из Aspergillus sp. (фирма «Amano Pharmaceutical»), который применяется для лечения диареи у новорожденных. В настоящее время в США лактаза как средство, помогающее пищеварению, занимает 40% от всего количества производимых пищеварительных ферментов. В нашей стране производство низколактозного молока и молочных продуктов отсутствует. Не производятся и лекарственные средства для коррекции дефищ1та лактазы. Импортные препараты, присутствующие на российском фармацевтическом рынке, не удовлетворяют спрос в полном объеме и, кроме того, имеют высокую стоимость. В связи с этим проблема создания конкурентоспособного отечественного высокоэффективного ферментного препарата Р-галактозидазы, который может быть использован как для предварительного гидролиза лактозы в молоке и молочных продуктах, так и для приема внутрь, отличающегося от зарубежных аналогов существенно более низкой ценой, является весьма актуальной, как с позиции социального эффекта, так и с позиции развития биотехнологии одной из стратегически важных отраслей экономики. В НТЦ «Лекбиотех» на основе глубинного культивирования микроскопического гриба Penicillium canescens F-178 продуцента Р-галактозидазы разработана технология получения ферментного препарата Лактоканесцин, предаазначенного для гидролиза лактозы в молочной сыворотке. Наличие препарата, содержащего Р-галакгозидазу и разрешенного к применению в пищевой промыпшенности, а также значительная потребность отечественного здравоохранения в пищеварительных средствах с лактазной активностью, явились основой для исследований по получению из препарата Лактоканесцин препарата Р-галактозидазы медицинского назначения. Цель настоящего исследования состояла в разработке эффекгивной технологии получения высокоочищенного ферментного препарата грибной р-гаиактозидазы